مجموعة أدوات الكشف عن مستضد الدم الكامل السريع ، 150-250ul مجموعة اختبار مستضد منزلية

مع أداة IVD الطبية للقيام باختبار SARS-CoV-2 لتحييد الجسم المضاد السريع

مجموعة اختبار تحييد الأجسام المضادة المتوهجة واختبار الأجسام المضادة المعادلة السريع

تم إجراء اختبار الأجسام المضادة المعادلة للفيروسات الكاذبة كما هو موضح سابقًا (5).لفترة وجيزة ، تم زرع خلايا Vero في 96 طبقًا جيدًا لإنتاج طبقة أحادية في وقت الإصابة.تم إنشاء كميات مسبقة من rVSV-SARS-Cov-2 [phCMV3-SARS-CoV-2 spike SARS-CoV-2-pseduotyped VSV-ΔG-GFP (بروتين فلوري أخضر) عن طريق عدوى خلايا HEK293T ، تم حضانة ATCC CRL-3216] باستخدام البلازما البشرية المخففة تسلسليًا عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة قبل إضافتها إلى طبقات أحادية الخلية متكدسة (ATCC CCL-81) في لوحات 96 بئر.تم تحضين الخلايا لمدة 12 إلى 16 ساعة عند 37 درجة مئوية في 5٪ من ثاني أكسيد الكربون2.تم بعد ذلك إصلاح الخلايا في بارافورمالدهيد بنسبة 4 ٪ ، ملطخة بـ 1 ميكروغرام / مل من Hoechst ، وتم تصويرها باستخدام مصور CellInsight CX5 لتحديد العدد الإجمالي للخلايا التي تعبر عن GFP.تم تطبيع العدوى إلى متوسط ​​عدد الخلايا المصابة بـ rVSV-SARS-CoV-2 المحتضنة بالبلازما البشرية الطبيعية.تم إنشاء LOD على أنه <1:20 على أساس عينات البلازما من سلسلة من عناصر التحكم غير المكشوفة.تم ضبط الإشارات السلبية على 1:19.تحييد IC50 (متوسط ​​التركيز المثبط) تم حساب التتر باستخدام انحدار One-Site Fit LogIC50 في GraphPad Prism 8.0.

مقايسة تحييد تعتمد على الأسفار عالية الإنتاجية

لملء الفجوة الخاصة بالتشخيص المصلي وتقييم اللقاح لـ COVID-19 ، قمنا بتطوير مقايسة قائمة على التألق والتي تقيس بسرعة وبشكل موثوق تحييد مراسل SARS-CoV-2 بواسطة الأجسام المضادة من عينات المرضى.تم بناء الاختبار على مستقر mNeonGreen (mNG) SARS-CoV-2 حيث تمت هندسة جين mNG في ORF7 من الجينوم الفيروسي (الشكل.1 أ)10.التسلسل الكامل لـ mNG SARS-CoV-2 موصوف في الشكل التكميلي.1.شكل1 بيصور المخطط الانسيابي لمقايسة تحييد المراسل في شكل 96 بئر.تم تفصيل بروتوكول الفحص في الطرق التكميلية.باختصار ، تم تخفيف أمصال المريض بشكل متسلسل واحتضانها بالفيروس المراسل.بعد الحضانة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة ، أصيبت خلايا Vero CC-81 (المزروعة مسبقًا في لوحة 96 بئر) بمخاليط الفيروس / المصل عند تعدد العدوى (MOI) بمقدار 0.5.في 16 ساعة بعد الإصابة ، تم تحديد كمية الخلايا الإيجابية من mNG باستخدام قارئ تصوير عالي المحتوى (الشكل 4 ج).1 ب).وتجدر الإشارة إلى أنه تم اختيار خلايا Vero CC-81 ، وليس خلايا Vero E6 ، لفحص mNG لتمكين التحديد الكمي الدقيق للخلايا الفلورية.تم تحليل ستين عينة مصل من COVID-19 من المرضى المؤكدين بواسطة RT-PCR و 60 عينة مصل غير COVID-19 (تم أرشفتها قبل ظهور COVID-19) باستخدام فيروس المراسل.بالنسبة لبعض العينات الإيجابية لـ COVID-19 ، كانت أيام جمع العينات بعد الفيروس إيجابية RT-PCR ومُشار إليها في الجدولالجدول 1.1.بعد الإصابة الفيروسية المبلغ عنها ، تحولت الخلايا إلى اللون الأخضر في غياب المصل (الشكل.1 ج، اللوحة السفلية)؛في المقابل ، أدى احتضان الفيروس المراسل بمصل مريض COVID-19 إلى تقليل عدد الخلايا الفلورية (اللوحة العلوية).تم الحصول على منحنى الاستجابة للجرعة بين عدد الخلايا الفلورية وطية تخفيف المصل (الشكل.1 د والشكل التكميلي. 2) ، مما سمح بتحديد طية التخفيف التي تحيد 50٪ من الخلايا الفلورية (NT50).قام اختبار المراسل بتشخيص 120 عينة بسرعة خلال 24 ساعة: أظهرت جميع المصل الـ 60 COVID-19 (العينات من 1 إلى 60) NT إيجابية50 من 35 إلى 5711 ، وأظهرت جميع المصل 60 غير COVID-19 (العينات 61-120) NT سلبية50 من <20 (جدول 1).

معامل: